Objetivo de muestra

El epigenoma es más susceptible a los cambios inducidos por el medio ambiente en la etapa prenatal, cuando las marcas epigenéticas se restablecen después de borrarse después de la fertilización [15, 16]. El estudio propuesto investigará el impacto de la exposición a altas temperaturas en las etapas tempranas y tardías del desarrollo embrionario en la supervivencia ninfal, el tiempo de desarrollo y los rasgos morfológicos y reproductivos de los adultos de C. scorpioides. Los ncRNA se extraerán de los tejidos testiculares y ováricos de individuos experimentales y se congelarán para la posterior construcción de bibliotecas y secuenciación de ARN. El objetivo de este proyecto es aumentar nuestra comprensión de la etapa de la historia de vida en la que los ectotermos tropicales son más vulnerables al calentamiento climático.

Este estudio probará la hipótesis de que la exposición a altas temperaturas durante el desarrollo embrionario tiene un impacto negativo en este pseudoescorpión neotropical. Dado que la reprogramación epigenética ocurre poco después de la fertilización, se predice que los efectos perjudiciales del aumento de temperatura serán más severos en individuos que experimentan temperatura alta cuando son embriones en etapa temprana, en comparación con aquellos que están expuestos más adelante en el desarrollo embrionario. También se predice que la exposición embrionaria temprana causará una mayor alteración de los perfiles de expresión de ncRNA pequeños que la exposición tardía.

Variación de temperatura durante el desarrollo embrionario. Los apareamientos se realizarán en tres bloques con 27 parejas de machos y hembras no emparentados por bloque. Las hembras serán asignadas aleatoriamente a uno de tres tratamientos de temperatura fluctuante diurna: un tratamiento de exposición temprana (E); un tratamiento de exposición tardía (L) y un tratamiento de control (C). Las hembras del tratamiento C se mantendrán durante toda la gestación en una incubadora programada para una temperatura promedio de 27,3°C, la temperatura promedio actual en el hábitat natural de C. scorpioides. En el tratamiento E, las hembras serán transferidas a una incubadora idéntica programada para una temperatura promedio de 29,3°C (+ 2°C) durante los días embrionarios 1 - 5 (E1 - 5) y luego regresarán a la incubadora de control. Las hembras L se mantendrán a la temperatura de control durante E5 y luego se cambiarán a la incubadora de temperatura más alta durante E6 - 10. El día 5 de desarrollo embrionario, los sacos de cría de todas las hembras grávidas se fotografiarán con gran aumento y se determinará el número de Se cuentan los embriones. Se controlará el estado reproductivo de las hembras, se registrarán los casos de aborto espontáneo y se contará el número de protoninfas (ninfas de primera etapa) nacidas de hembras que lleven crías con éxito a término para documentar la supervivencia.

Criar ninfas hasta la edad adulta. Se criará un subconjunto de 20 protoninfas de cada hembra hasta la etapa adulta en viales individuales a la temperatura de control. Se registrará el tiempo de desarrollo desde el nacimiento hasta la edad adulta y, en el caso de los viales que no produzcan un adulto dentro de los 60 días posteriores al nacimiento, se considerará que la ninfa no ha sobrevivido.

Rasgos adultos. Para evaluar los efectos de la temperatura en los rasgos morfológicos, se fotografiarán con gran aumento las crías adultas masculinas y femeninas de los tratamientos E, L y C, y se medirán cinco rasgos de los pedipalpos (apéndices utilizados en la captura de presas y el combate de machos) y el cefalotórax. Para determinar los efectos sobre los rasgos reproductivos, los descendientes machos de los tres tratamientos se aparearán con hembras no experimentales y se recolectarán paquetes de esperma para cuantificar la cantidad y la viabilidad de los espermatozoides. Las crías femeninas de cada tratamiento se aparearán con machos no experimentales. La cantidad de embriones en etapa temprana que produzcan las hembras proporcionará una medida de su fertilidad, y su éxito reproductivo se cuantificará contando la cantidad de ninfas nacidas.